成体兔转基因成纤维细胞的克隆分离及其核移植研究

摘要：

哺乳动物体细胞核移植及其与转基因技术的结合为转基因动物的研究提供了新的思路和方法.然而,单个转基因细胞克隆的分离培养一直比较困难,很大程度上限制了转基因动物的研制.将pRNAT-U6.1/Neo质粒转染成体兔成纤维细胞,通过24孔细胞培养板分离培养法获得来源于单个转基因成纤维细胞克隆.由于单个成纤维细胞克隆在新鲜DMEM培养液中生长比较困难或缓慢,采用由DMEM/F12制备的条件性培养液进行筛选.以转基因成纤维细胞为供体细胞进行核移植,囊胚率为23.5%,与来源于成体兔正常成纤维细胞相比较差异不显著.并且利用PCR或多重PCR方法鉴定筛选的转基因细胞克隆及其核移植胚胎中整合的Neo 基因和常染色体β-actin DNA.为转基因哺乳动物细胞的分离培养和核移植胚胎的鉴定提供可靠的方法,缩短了转基因动物的研制周期,降低生产成本,同时为进一步通过核移植技术获得转基因克隆兔提供了条件.

关键词：成体兔、细胞分离、多重PCR、核移植、转基因检测

所属期刊栏目：36

分类号：O7(晶体学)

资助基金：上海市科委基础研究重点项目08JC1413900;上海市科技兴农重点攻关项目沪农科攻宁2006第5-3号;上海市重点学科建设项目S30201

在线出版日期：2009-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1186-1192