敲除山羊胎儿成纤维细胞中的抗体重链基因

摘要：

在针对大动物的精确基因修饰研究中,基于体细胞的同源重组是唯一可行与有效的方法.其中,沉默基因位点的重组尤为困难.为获得抗体基因功能缺失的山羊用于人源化抗体的研究,通过体细胞同源重组技术,首次成功地获得了抗体基因敲除的山羊胎儿成纤维细胞株,该细胞株可用于体细胞克隆制备抗体基因功能缺失的转基因山羊.以35日龄的山羊胎儿成纤维细胞(GEF88)基因组DNA为模板,扩增山羊抗体重链J-Cμ基因作为同源臂,构建了同基因型的正负筛选打靶载体GTIgH.将此打靶载体经电穿孔的方法转染GEF88细胞,并通过0.8 mg/L的嘌呤霉素进行药物筛选,获得了362个抗性细胞克隆,PCR、测序及DNA印迹鉴定结果显示,其中的GT211抗性细胞克隆为中靶细胞,该细胞克隆中的抗体重链基因的一条等位基因已被成功敲除.

关键词：基因敲除、体细胞基因打靶、山羊胎儿成纤维细胞、抗体重链基因(IgH)、沉默基因

所属期刊栏目：35

分类号：R39;S85

资助基金：上海市科委国际合作计划资助项目055407033

在线出版日期：2008-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：899-904