siRNA沉默socs3对红系发育的影响

摘要：

为了研究细胞因子信号转导分子3(suppressor of cytokine signals-3,SOCS-3)对造血发育的影响,构建了SOCS-3慢病毒siRNA干涉载体,并转染人红白血病细胞株K562.根据绿色荧光蛋白的表达进行流式分选后,获得了高表达慢病毒干涉载体的细胞.实时荧光定量PCR和Western-blot检测了转染细胞中SOCS-3基因的干涉效率,结果显示,与对照组相比,siRNA干涉后K562细胞SOCS-3基因的表达量仅为其相对表达量的22.1%,干涉效率77.9%;Western-blot结果显示,SOCS-3在蛋白质水平表达也明显受抑制.进一步对SOCS-3基因沉默后的K562细胞进行了诱导分化,并采用联苯胺染色法检测K562细胞向红系分化比例变化,免疫荧光染色检测细胞表面抗原的变化,RT-PCR检测造血相关基因的变化.结果发现,SOCS-3沉默后K562细胞向红系的发育能力显著提高.研究结果证明,SOCS-3在造血发育中有重要调控作用,而对其表达进行干涉或沉默将在规模化的红细胞诱导研究中发挥重要作用.

关键词：siRNA、基因沉默、SOCS-3、慢病毒、K562细胞

所属期刊栏目：35

分类号：Q28;R34(细胞生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863重大专项2006AA02A107;国家重点基础研究发展规划9732005CB522702;北京市科委重大项目培育专项Z0005190043331

在线出版日期：2008-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：778-784