siRNA沉默G6PD表达对人皮肤黑色素瘤细胞生长及凋亡的影响

摘要：

研究表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与肿瘤的发生、发展、临床表型及治疗和预后有关.为阐明G6PD与肿瘤的关系及其机理,针对人G6PD基因设计3条siRNA和一条无关序列,再据每一序列,合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-u6.2/Lenti连接,转染人皮肤黑色素瘤A375细胞,Real-time PCR筛选有效的一条siRNA,经病毒颗粒包装和病毒生产并感染A375细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,Western blotting检测siRNA干扰G6PD效率为88.83%,构建成G6PD缺陷型A375稳转细胞(A375-G6PDA).与野生型A375细胞(A375-WT)比较,A375-G6PD△的G6PD活性仅为21.53%,细胞倍增时间延长,增殖被抑制,克隆形成率降低25%(P<O.05),凋亡细胞数增加2.86倍(P<0.01),SPF增加33.8%(P<O.05),PI增加59.7%(P<0.01),G0/G1期下降27.7%(P<0.01),凋亡相关蛋白P53下降54.7%(P<O.01)、Caspase-3增加2.2倍(P<0.01)和Bcl-2降低21.7%(P>0.05),提示,G6PD缺陷可能通过下调P53蛋白表达和上调Caspase.3的表达,抑制G2/M期向G0/G1期转换的进程,促进A375的凋亡,机理有待于进一步探讨.

关键词：siRNA干扰、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、人皮肤黑色素瘤、稳转细胞株、细胞周期、P53、Caspase-3

所属期刊栏目：35

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30460049

在线出版日期：2008-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：327-334