硫色曲霉木聚糖酶基因xynA与xynB在大肠杆菌中的融合表达及酶学性质分析

摘要：

根据硫色曲霉木聚糖酶基因xynA和xynB序列设计引物,PCR扩增获得574 bp、594 bp的目的基因片段.两段DNA分别用EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ、Bgl Ⅱ/HindⅢ酶切后,连接到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建了xynA和xynB融合表达载体pET-xynAB,即在木聚糖酶A和B之间引入了7个氨基酸的寡肽序列(GlyGlyGlySerGlyGlyGly).将pET-xynAB转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测到了一条约50 ku的特异性表达条带.Ni-NTA柱纯化后的特异性蛋白经8 mol/L脲素变性,梯度透析使蛋白质复性.酶学性质分析表明,该重组木聚糖酶的最适催化温度为50 ℃,最适pH值为4.4.在pH 2.4～5.4范围内,酶的相对活性都在75%以上,重组酶在80℃保温30 min还有近50%的残余酶活.不同种类的金属离子对重组酶的活力影响不同.

关键词：硫色曲霉、木聚糖酶、融合表达

所属期刊栏目：34

分类号：Q78;Q81(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技部动物营养与饲料加工创新群体科学基金30121004

在线出版日期：2007-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1086-1091