siRNA沉默HIF-1α对胎肝基质细胞SDF-1α表达的影响

摘要：

为了研究低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)在干细胞增殖分化过程中的作用机制,构建了2个HIF-1α慢病毒siRNA干涉载体,并转染人胎儿肝脏基质细胞(fetal liver stromal cell,FLSC).根据绿色荧光蛋白的表达评估转染效率后进行流式细胞分选,获得高表达慢病毒干涉载体的细胞.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测了转染细胞中HIF-1α基因的干涉效率,结果显示,与对照组相比,常氧下培养的细胞HIF-1α基因表达量仅为其相对表达量的18.8%和25.5%,干涉效率分别为81.2%和74.5%,低氧处理后的细胞HIF-1α相对表达量分别为对照组的21.2%和29.3%,干涉效率分别为78.8%和70.7%,均具有显著差异.蛋白质印迹结果显示,在蛋白质水平表达也明显受抑制,且重组干涉质粒pSicoR-HIF-1α1的干涉效应较强.RT-PCR、免疫荧光和EUSA法检测了沉默HIE-1α后胎肝基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)在RNA和蛋白质水平的表达变化,干涉后细胞SDF-1α的表达明显减低.低氧条件下SDF-1α基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在干细胞增殖分化的分子调控机制中具重要作用.

关键词：siRNA、基因沉默、低氧诱导因子1α、慢病毒、基质细胞、基质细胞衍生因子1α

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分类号：Q2;R3

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA02A107;国家重点基础研究发展计划973计划2005CB522702;北京市科委重大项目Z0005190043331

在线出版日期：2007-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1040-1048