含蛋白质转导域的Ngb融合蛋白的原核表达、纯化及其生物学活性的初步研究

摘要：

以SD大鼠脑组织RNA为模板,利用RT-PCR技术,将HIV-1反式激活蛋白(TAT)中具有蛋白质转导功能的9个氨基酸序列,即蛋白质转导域(PTD)基因与脑红蛋白(Ngb)基因融合,应用T-A克隆技术将融合基因与pMD19-T simple载体连接,经测序正确后克隆至表达载体pET28b中,转化感受态E.coli BL21(DE3)plysS,得到的转化子经IPTG诱导后获得可溶性表达,并经蛋白质印迹检测进一步鉴定.表达产物经Ni2+亲和纯化层析、脱盐后在原代培养的大鼠皮质神经元进行生物学活性检测,结果显示,TAT PTD-Ngb融合蛋白可以转运入皮质神经元内,在48h内可检测到其存在,并能提高缺氧条件下皮质神经元存活率、减少缺氧诱导的皮质神经元的凋亡.这一结果为进一步研究TAT PTD-Ngb的神经保护机制提供了线索,并可能为神经系统疾病尤其是脑血管疾病、神经系统退行性疾病提供一个新的治疗策略.

关键词：蛋白质转导、脑红蛋白、蛋白质治疗

所属期刊栏目：34

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家"211"工程建设项目4209601

在线出版日期：2007-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：634-641