转录因子E2F1抑制CREG表达调控体外培养的人血管平滑肌细胞分化

摘要：

为探讨转录因子E2F1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化中的作用及其对E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of ElA-stimulated genes,CREG)表达调控的分子机制,应用生物信息学方法,定位人CREG(hCREG)基因启动子并确定转录因子E2F1在hCREG启动子区的结合位点,PCR方法克隆并构建hCREG基因启动子绿色荧光报告基因载体,以hCREG启动子区E2F1结合位点为模板,化学合成E2F1寡聚脱氧核苷酸(ODN)和错配E2F1 ODN,利用转录因子"诱骗(Decoy)"策略,用E2F1 ODN转染体外培养的VSMCs以阻断E2F1与hCREG基因启动子区的结合,蛋白质印迹(Western blot)分析检测阻断前后细胞内hCREG蛋白、报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和平滑肌细胞分化标志蛋白SM α-actin表达变化.结果显示:分化表型HITASY细胞中E2F1表达下调伴出核转位,而增殖表型的HITASY细胞中E2F1蛋白表达明显增加且定位于核内.进一步应用FuGene 6瞬时转染E2F1 ODN和错配E2F1 ODN于体外培养HITASY细胞中,蛋白质印迹分析发现,转染E2F1 ODN后,HITASY细胞中hCREG、SM α-actin和GFP表达均较未阻断组及错配组细胞明显增加.上述研究结果证实,E2F1是hCREG基因转录的重要调控因子,能够直接结合于hCREG启动子区阻遏hCREG表达,参与hCREG蛋白对VSMCs表型转化的调控作用.

关键词：E2F1、转录因子、阻遏蛋白、E1A、表型、血管平滑肌细胞

所属期刊栏目：34

分类号：Q555.7;R34(酶)

资助基金：国家自然科学基金30570664;辽宁省自然科学基金2050426

在线出版日期：2007-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：490-496