HIV Gag CAP2NC噬菌体蛋白酶切割模型的构建

摘要：

HIV蛋白酶(protease,PR)耐药突变的大量出现严重地影响了AIDS的治疗.应用突变PR对展示HIV PR靶序列随机文库的噬菌体进行切割筛选,可获得突变PR的敏感噬菌体,该噬菌体可用于针对HIV PR耐药突变株的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)新药筛选.为了探索这一可能性,将包含HIV PR靶位点P2/NC序列的Gag蛋白CAP2NC片段展示于噬菌体表面,并在该片段的N端连接一可与人免疫球蛋白分子特异结合的固相化标签序列LD3,将该噬菌体固定于人免疫球蛋白包被的酶标板上,用HIV SF2 PR进行切割,用抗M13噬菌体酶标抗体ELISA法检测未被切割的剩余噬菌体以反映切割效果.结果表明,所构建的噬菌体能被HIV PR有效切割,最大切割效应可达80%以上,其ELISA检测值明显下降,并且该切割效应与HIV PR呈明显的量效关系,能被PI类药物Indinavir(IDV)特异抑制.首次成功构建了展示HIV GagCAP2NC片段的噬菌体蛋白酶切割模型,不仅可为研究HIVPR的耐药性变异及其靶序列的适应性变异提供一新的研究平台,同时也为构建一种全新的PI类药物,尤其是针对耐药的PI类药物大规模体外噬菌体筛选模型打下基础.

关键词：人类免疫缺陷病毒、蛋白酶、蛋白酶抑制剂、药物筛选、噬菌体展示

所属期刊栏目：34

分类号：Q5(生物化学)

资助基金：国家自然科学基金30472050;上海市科技攻关项目05dz19317

在线出版日期：2007-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：317-325