10.3321/j.issn:1000-3282.2006.08.006
转录因子X-box结合蛋白1相互作用蛋白的筛选和鉴定
X-box结合蛋白1是一种重要的转录因子,参与体内多项信号转导过程.为进一步研究XBP1的生物学功能,运用酵母双杂交技术在肝细胞文库中筛选XBP1的结合蛋白.首先运用PCR技术扩增获得XBP1的编码序列,克隆至pGEM-T载体,经测序鉴定后,亚克隆至诱饵载体pGBKT7中,转化酵母AH109(a type).免疫印迹检测诱饵质粒pGBKT7-XBP1在AH109酵母中的表达之后,含有诱饵质粒的酵母AH109与含有肝细胞cDNA文库质粒pACT2的酵母Y187(αtype)配合,配合后的二倍体酵母生长在含有X-α-gal的营养缺陷型培养基上(SD/-Trp-Leu-His-Ade)进行选择和筛选,经测序和序列比对确定阳性克隆的开放读码框ORF,得到7种不同的蛋白质.为了进一步验证这些筛选蛋白质与XBP1的相互作用,克隆其中一种蛋白质MT1E,并运用GST pulldown和免疫共沉淀技术成功检测了MT1E和XBP1的相互作用(体外/体内),结果提示,MT1E可能是XBP1的一个新的调节蛋白.通过酵母双杂交技术筛选得到的7种蛋白质分别与肝细胞基础代谢、蛋白质的合成与运输、细胞的增殖与凋亡密切相关.上述结果有助于揭示XBP1的生物学功能,为进一步探讨XBP1的表达和调控机制提供新线索.
X-box结合蛋白1、酵母双杂交、转录因子、诱饵
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Q5(生物化学)
国家自然科学基金30371479
2006-09-12(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共9页
745-753