尿激酶催化结构域在毕氏酵母中的表达、纯化及结晶

摘要：

利用重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域的突变体基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化酵母X-33,用Zeocin筛选高拷贝数的酵母菌落.重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化,纯度达到99%,该仅含尿激酶催化结构域的突变体(C279A/N302Q),无需激活即具有尿激酶活性.用气相扩散法获得蛋白质晶体,其衍射分辨率达1.45(A).

关键词：尿激酶、Pichia pastoris、纤溶酶原、重叠延伸PCR、结晶

所属期刊栏目：33

分类号：Q71(生物大分子的结构和功能)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划30430190;国家重点实验室基金021061;中国科学院"百人计划"

在线出版日期：2006-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：377-381