一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立

摘要：

为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总RNA(或cDNA),经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率.与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%),而传统的2△△△CT法却表现出较大的定量误差.这些结果表明,新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法.

关键词：荧光实时定量RT-PCR、相对定量、绝对定量、标准曲线、mRNA定量、斜率

所属期刊栏目：32

分类号：Q781(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏省高校自然科学基金04KJD180044;江苏大学校科研和教改项目2281270002

在线出版日期：2005-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：883-888