端粒酶催化亚基基因在小鼠胚胎发育早期的转录活性

摘要：

用RT-PCR引物分别扩增成年昆明(KM)小鼠睾丸、脾脏、肾脏、肝脏和胸腺组织的总RNA发现,端粒酶催化亚基基因tert在这些组织中都有转录,目标产物正确组装到PMD 18-T载体后测序,结果与己知cDNA序列一致.PMSG/hCG超数排卵方法获得KM小鼠成熟卵母细胞和CZB溶液体外培养的胚胎(KM♀×KM ♂),用酸性Tyrode's溶液消化透明带后,采用巢式RT-PCR,同时分析tert基因和持家基因hprt的转录发现,对于单个样品来说,全部卵母细胞(15 h-post hCG,10/10)都存在hprt转录本,其中,只有40%(4/10)还同时存在tert转录本.原核形成初期(20 h-post hCG,6/6)和原核晚期(30 h post-hCG,8/8)的受精卵,以及发育至2-C早期的胚胎(35 h-post hCG,7/7)都不转录tert基因,只有hprt mRNA存在;2-C晚期(50 h-post hCG)时,两个基因同时转录(4/8)和一个基因单独转录(4/8)的胚胎各占50%;从4-C阶段(65 h-post hCG,4/4)开始,包括8-C阶段(75 h-posthCG,4/4),桑椹胚阶段(93 h-post hCG,4/4),直至囊胚阶段(118 h-post hCG,4/4),所有的胚胎都同时转录tert和hprt基因,而且转录水平明显升高.以20枚胚胎量为模板进行RT-PCR发现,原核早期,原核晚期的胚胎中仍然没有tert基因转录,只有hprt mRNA,但是,在2-C早期胚胎中同时检测到了hprt和tert两种mRNA.结果表明,持家基因hprt在成熟卵母细胞受精前后,以及胚胎早期发育过程中均存在转录本.40%卵母细胞中存在的tertmRNA在受精后很快降解,检测不到;胚胎基因组在2-C早期开始转录tert mRNA,转录水平逐渐上升.结果暗示,小鼠胚胎的基因组DNA在2-C早期开始启动,功能基因tert也在此时开始转录,可能与胚胎发育初期的染色体保护有关.

关键词：小鼠、卵母细胞、胚胎、tert基因、hprt基因、端粒酶、RT-PCR

所属期刊栏目：32

分类号：Q27(细胞生物物理学)

资助基金：国家自然科学基金30270647;北京市自然科学基金5012007;国家重点实验室基金2002AA206311;国家高技术研究发展计划863计划2002AA206311

在线出版日期：2005-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：282-287