牛分枝杆菌MPB63基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB63成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约400 bp的DNA片段.通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-63.以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-63和pET28a(+),并将纯化的MPB63基因亚克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达载体pET28a-63.将pET28a-63转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可见约18 ku外源蛋白带.蛋白质印迹分析发现,该蛋白质具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究MPB63的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础.

关键词：牛分枝杆菌、MPB63基因、克隆、原核表达

所属期刊栏目：32

分类号：Q786;S855.2(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国科学院资助项目30270986;国家科技攻关项目2003AA241121002;吉林农业大学校科研和教改项目

在线出版日期：2005-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：129-132