10.3321/j.issn:1000-3282.2004.10.007
用于FK506类小分子化合物筛选的细胞模型的建立
建立FKBP12/Fas双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型,为FK506类小分子化合药物的初步筛选提供一个可应用的技术平台.首先利用RT-PCR方法钓取人源性Fas胞浆区基因,测序鉴定正确后,插入到载体pC4M-FV2E中,构建pC4M-FV2E/Fas表达质粒.然后将Myr-FKBP12-Fas融合基因从pC4M-FV2E/Fas质粒克隆进pEGFP-N1中.最后将重组质粒pEGFP-N1/FKBP12-Fas转染进HEK293细胞,并利用G418筛选融合基因FKBP12-Fas稳定表达的细胞株.实验结果显示,阳性化合物AP20187作用4~6 h后,稳定转染的靶细胞发生凋亡,基因组呈现典型的"DNA Ladder",而FKBP12的天然结合蛋白FK506可竞争性地阻断这种阳性药物诱导的细胞凋亡.研究提示:所构建的细胞模型,可用于以FKBP12为靶标、基于FK506空间构型设计合成的FK506类小分子化合药物的初步筛选.
融合表达、细胞模型、细胞凋亡、竞争抑制
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Q2(细胞生物学)
国家重点基础研究发展计划973计划2003CB515508
2004-12-16(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共7页
895-901