鼻咽癌细胞中p53相互作用蛋白质的分离和鉴定

摘要：

鼻咽癌中p53基因突变罕见,但绝大部分鼻咽癌中存在p53蛋白过表达/聚集且功能失活.然而,到目前为止p53蛋白失活的机制仍然不清楚.为揭示鼻咽癌中p53蛋白功能失活的机制,采用免疫共沉淀技术分别富集鼻咽癌细胞系HNE1和HNE2的p53结合蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,从胶中切取p53结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)分析,得到相应的肽序列标签(peptide sequence tags,PST),通过搜索数据库在鼻咽癌细胞系中鉴定了9个p53结合蛋白.分别是热休克蛋白70(HSP70)家族成员GRP-78和GRP-75、HSP90家族成员GRP-94、核纤层蛋白A/C(Lamin A/C)、α-actinin 4、Ezrin/Cytovillin、DNA复制准许因子/MCM3蛋白(DNA replication licensing factor/minichromosome maintenance 3 protein,MCM3)、CD98/4F2 heavy chain和蛋白激酶C(PKC).并用免疫共沉淀和蛋白质印迹分析技术对HNE1细胞蛋白条带3鉴定的p53相互作用蛋白之一HSP78进行了验证.首次在鼻咽癌细胞中鉴定了9个p53结合蛋白,为阐明鼻咽癌中p53蛋白聚集及失活的机制提供了重要依据和线索.

关键词：p53、鼻咽癌、免疫共沉淀、液相色谱-电喷雾串联质谱、相互作用蛋白、蛋白质印迹

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分类号：R739.62(肿瘤学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划;国家自然科学基金30000028,30240056,30370642;教育部跨世纪优秀人才培养计划教技函[2002]48;湖南省科研项目02SSY2001-1;湖南省卫生厅科研项目Z02-04

在线出版日期：2004-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：628-634