一种人胰岛素类似物的制备、鉴定与活性研究

摘要：

采用PCR方法,将人胰岛素分子B链B10位His突变为Glu,在B25和B26位之间插入Glu,构建了[B10 Glu,B25-Glu-B26]胰岛素原融合蛋白基因.利用通用型质粒pBV220构建表达载体,在大肠杆菌DH5α中表达,表达蛋白为包含体形式,约占菌体总蛋白的20%～30%.经过复性、凝胶过滤等步骤得到胰岛素原融合蛋白.用胰蛋白酶和羧肽酶B酶切,经过DEAE离子交换和RP-HPLC纯化得到胰岛素突变体类似物,并经过质谱测定鉴定.凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质,圆二色谱(CD)测定了构象的变化.并分别测定了放免活性、受体结合活性及小白鼠低血糖惊厥实验.结果表明,突变体分子缔合性明显下降.放免活性和受体结合活性分别约为标准胰岛素的63.5%和114.4%, 整体活力略高于天然胰岛素.

关键词：胰岛素类似物、单体胰岛素、原核表达、生物学活性

所属期刊栏目：31

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2004-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：59-64