核因子-κB反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用

摘要：

建立核因子-κB(NF-κB)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统,作为筛选NF-κB拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具.分别以EGFP与d2EGFP为报告基因、neor为筛选基因,构建成4×κB基序为增强子、SV40为基本启动子的报告基因载体p4κB-EGFP和p4κB-d2EGFP.两载体分别与p65载体瞬时共转染HEK293细胞,通过比较不同时相点EGFP和d2EGFP的调控表达,证明p4κB-d2EGFP是较理想的NF-κB反应性绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体.将p4κB-d2EGFP稳定转染HEK293细胞,从而获得NF-κB反应性报告细胞株HEK-d2EGFP.应用NF-κB"圈套"寡核苷酸(TFD)与p65载体瞬时共转染HEK-d2EGFP,1 mg/L NF-κB和2 mg/L NF-κB TFD组对p65蛋白诱导调控表达的d2EGFP具有明显拮抗作用.结果表明,NF-κB反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测NF-κB的活性变化.

关键词：基因表达调控、不稳定增强型绿色荧光蛋白、κB基序、核因子-κB、寡核苷酸

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分类号：Q743;R365;R45(生物小分子的结构和功能)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G1999054203;国家自然科学基金30080009

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：78-83