细胞内物质转运调节分子ARFGAP3的克隆表达及生化活性

摘要：

ADP核糖基化因子-GTP酶活化蛋白(ARFGAP)是重要的细胞内物质转运调节分子.在22周孕龄人胎肝cDNA文库中发现一种新基因，其编码的氨基酸序列与大鼠ARF1 GAP有32%同源性.将这种新基因命名为"ARFGAP 3"，对其进行功能研究，利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)，从人胎盘总RNA中扩增A RFGAP3全长cDNA序列，并将其亚克隆到pGEM-T载体；采用RNA印迹法和斑点杂交法，检测其组织表达谱，发现在多种腺体和睾丸中有很高水平ARFGAP3基因转录，并且只有一种约2.7 kb 的转录本.利用基因重组技术，构建表达质粒pBAD/Thio-ARFGAP3，在大肠杆菌中表达，采用亲和层析法纯化表达产物，利用肠激酶切除重组融合蛋白N端引导序列.检测重组ARFGAP3的生化活性，证实ARFGAP3对ARF1具有GAP活性，促进ARF1结合的GTP水解为GDP，磷脂酰肌醇二磷酸 (PIP2)增强其GAP活性，而磷脂酰胆碱(PC)抑制其GAP活性.

关键词：ARFGAP3、细胞内物质转运、ADP核糖基化因子、GTP酶活化蛋白、生化活性

所属期刊栏目：28

分类号：Q73(生物膜的结构和功能)

资助基金：国家自然科学基金39730310,30070386

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：507-513