法尼醇X受体激动剂细胞筛选体系的建立与优化

摘要：

本研究旨在建立一种基于双荧光素酶报告基因检测体系的法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)激动剂细胞筛选体系,以满足对FXR激动剂先导化合物的高通量筛选.通过在报告基因质粒pGL4-luc2P-Hygro中的萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,Luc)基因上游克隆并插入来自FXR靶基因的FXR反应元件(FXR response element,FXRE)片段,构建用于筛选FXR激动剂的报告基因质粒,并结合海肾荧光素酶内参质粒,建立能够有效反映药物对FXR激动效应的双荧光素酶报告基因细胞检测体系.通过一系列优化实验,比较了过表达RXR、鼠源和人源FXR、不同的FXRE片段、FXR过表达质粒与报告基因质粒的混合比对筛选体系诱导效率和灵敏度的影响.根据上述结果,最终确定了优化条件,优化后体系Z因子达到0.83.本研究建立了一种用于FXR激动剂筛选的改良的基于双荧光素酶报告基因检测体系的细胞筛选体系,其主要特征在于,使用多段FXR靶基因上的FXRE片段叠加组成一种新型的增强型FXRE元件,而非传统的反向重复序列-1(inverted repeats-1,IR-1)片段的叠加,为FXR激动剂的发现提供了更好的手段和工具.

关键词：FXRE、双荧光素酶报告基因系统、高通量筛选、核受体

所属期刊栏目：39

分类号：R589;R977;R780.2

资助基金：国家自然科学基金81973376

在线出版日期：2023-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：359-371