一种检测kras基因突变的新型TB-ARMS qPCR方法的建立

摘要：

在荧光定量PCR基础上建立一种简单有效并且高度灵敏的TB-ARMS kras基因突变检测方法,并对其检测性能进行评估,探讨其临床应用价值.针对kras基因8种常见的点突变类型,通过设计并优化突变特异性引物、野生型特异性封闭引物并综合应用突变富集扩增反应条件等多种手段,提高点突变检测的灵敏度和特异性,采用已知野生型基因组样品和构建的突变质粒作为标准品,进行方法学评价;通过对临床样本的检测及与现有商品化试剂盒的比较进行性能验证;通过对术前血浆和配对组织样品的对比检测,评估方法是否适用于血液样本的检测.建立了TB-ARMS kras突变检测的新方法,能检测的最低突变率可达到0.01％.通过综合采用野生型特异性封闭引物和突变富集扩增条件等方法证明了其0.01％的突变检测灵敏度.检测准确性优于现有商品化试剂盒,血浆DNA TB-ARMS qPCR检测结果与配对组织DNA测序结果相符合.因此,TB-ARMS kras基因突变检测方法具有广泛的临床应用价值,既适用于临床组织样品的检测,也可应用于液体活检.

关键词：kras突变、突变检测、方法学、液体活检、个体化治疗

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资助基金：江苏省自然科学基金青年基金BK20150278;上海市科学技术委员会科研计划19431903200

在线出版日期：2019-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：880-891