家蝇抗菌肽AMPs17蛋白原核表达条件的优化及其抗真菌活性检测

摘要：

目的:优化AMPs17重组蛋白的原核表达条件, 分析重组蛋白的抗真菌活性.方法:比较不同的诱导温度(25℃、28℃、30℃、32℃、34℃) 、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG) 诱导浓度(0. 025mmol/L、0. 05mmol/L、0. 1mmol/L、0. 3mmol/L、0. 5mmol/L、0. 8mmol/L、1. 0mmol/L) 和诱导时间(12h、15h、18h、21h、24h) 对AMPs17重组蛋白表达量的影响, 筛选AMPs17重组蛋白的最佳表达条件;采用镍离子金属螯合剂亲和层析柱对重组蛋白进行纯化, SDS-PAGE和ImageJ图像分析系统对表达结果进行分析, Western blot对AMPs17重组蛋白进行鉴定, 高效液相色谱分析重组蛋白的纯度, 微量液体稀释法及菌落计数法检测其抗真菌活性.结果:在诱导温度为32℃、IPTG浓度为0. 05mmol/L的条件下诱导培养15h, AMPs17重组蛋白的表达量最高且最为稳定;HPLC色谱仪分析显示AMPs17重组蛋白纯度可达到90％以上;优化后的AMPs17重组蛋白能有效抑制白色念珠菌的生长.结论:优化了家蝇抗菌肽AMPs17的诱导表达条件, 获得了高表达、稳定且具有抗真菌活性的蛋白质, 为后续抗菌机制及应用研究提供一定的实验基础.

关键词：家蝇、家蝇抗菌肽-17、原核表达、条件优化、抗真菌活性

所属期刊栏目：39

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金81760647、81560337

在线出版日期：2019-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：24-31