构建重组枯草芽孢杆菌催化制备D-对羟基苯甘氨酸

摘要：

目的:在Bacillus subtilis中表达异源D-海因酶基因(hyd)和D-氨甲酰水解酶基因(adc),构建重组细胞作为催化剂,用于生产D-对羟基苯甘氨酸(D-HPG).方法:构建hyd表达质粒,考察培养基中二价金属离子对D-海因酶活性的影响.过表达acoR基因,考察AcoR蛋白胞内水平与PacoA-hyd基因拷贝数的关系.筛选表达adc基因的启动子,构建hyd和adc基因共表达质粒,考察双酶活性菌株的催化特性.结果:成功构建了海因酶表达质粒pHPS和pUBS,培养基中添加0.8mmol/L的MnCl2·4H2O,使168N/pUBS菌株的D-海因酶活性达到956U/gDCW.整合表达Pcdd-acoR基因,使LSL02/pUBS菌株的D-海因酶活性达到1 470U/gDCW.单拷贝PAE-adc基因的表达水平相对最高.双酶共表达质粒pUBSC被成功构建,菌株LSLO2/pUBSC的最适催化温度为40℃～45℃,催化活性能够持续12h,当底物起始浓度为20g/L时,反应12h生成的D-HPG达到14.32g/L,转化率达到95％,收率超过80％.结论:构建具有D-海因酶和D-氨甲酰水解酶双酶活性的重组Bacillus subtilis作为全细胞催化剂,用于海因酶法生产D-HPG,具有技术上的可行性和优势.

关键词：枯草芽孢杆菌、D-海因酶、D-氨甲酰水解酶、表达质粒、D-对羟基苯甘氨酸

所属期刊栏目：39

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2019-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：75-86