序列优化的小鼠IL-33基因在哺乳动物细胞中的有效分泌表达

摘要：

目的:白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用,在疾病中扮演着重要的角色.本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达,为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础.方法:根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(mIL-33)的氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成优化的mIL-33基因片段,通过搭桥PCR将编码人CD8α信号肽的核酸序列分别与优化或未优化的mIL-33基因连接,并与绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别构建到双表达单元质粒pBudCE4.1的不同启动子下;重组质粒经lipofectamine 3000和PEI转染293FT细胞;以Westem blot和ELISA检测重组蛋白的表达;收集表达的mIL-33刺激巨噬细胞Raw264.7,ELISA检测培养上清的TNFα水平,以证明IL-33的生物学活性.结果:重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功;lipofectamine 3000转染效率较PEI转染更高;Western blot和ELISA结果显示密码子优化的mIL-33表达水平较未优化序列更高,在EF-1α启动子和CMV启动子指导下mIL-33在293FT细胞表达水平相当,CD8α信号肽成功引导mIL-33的分泌,产物具生物学活性.结论:密码子优化操作显著改善了mIL-33在哺乳动物细胞中的表达水平,为进一步研究奠定了基础.

关键词：序列优化、白细胞介素-33、成熟肽(mIL-33)、293FT

所属期刊栏目：39

分类号：Q291

资助基金：本文研究工作受国家自然科学基金面上项目81773270;云南省应用基础研究重点项目2016FA049

在线出版日期：2019-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：46-55