SUMO蛋白酶Ulp1的高效表达纯化并通过His-SUMO标签制备scFv

摘要：

SUMO蛋白酶(Ulp1)是切割小分子泛素修饰(SUMO)融合蛋白获得天然N端靶蛋白的一种工具酶,具有酶切效率高、特异性好等优点.但现有市售SUMO蛋白酶Ulp1价格昂贵、操作复杂,限制了SUMO融合体系的运用.利用基因工程技术,合成基因ulp1(Leu403-Lys621),并在N端和C端加入多聚组氨酸标签(His6),构建重组表达载体psvT7-ulp1,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)和BL21 trxB(DE3)中.经过高通量筛选技术快速确定最优的表达条件为采用BL21(DE3)作为表达宿主,转接后7h加入IPTG,IPTG的终浓度为0.1mmol/L,诱导时间为16h,最终蛋白质表达量占菌体总蛋白质量的34.5％,重组蛋白Ulp1的表达量为190mg/L,通过Ni-NTA一步纯化即可得到纯度95％以上的Ulp1.通过酶切反应,测定酶活为5.19U/μl,比酶活为5.23×104U/mg,是先前报道比酶活的1.87倍,通过酶活动力学分析,Ulp1的表观米氏常数Km=0.359g/L,Vm =5.10μg/(ml·min).将SUMO融合表达体系用于单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)的表达,得到可溶的SUMO-scFv融合蛋白,使用表达的Ulp1进行酶切并纯化,获得纯度高于90％且N端不合多余氨基酸的scFv,操作步骤简单,显著改善了scFv在大肠杆菌中难以高效可溶性表达纯化的现状.

关键词：Ulp1、Ni-NTA、SUMO、scFv、高效表达纯化

所属期刊栏目：38

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家863计划2015AA020802

在线出版日期：2018-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：51-61