2型猪链球菌磷酸甘油酸激酶基因的克隆表达及酶活性测定

摘要：

目的:克隆表达2型猪链球菌中磷酸甘油酸激酶(PGK)并对其酶学特性进行测定.方法:采用PCR方法从05ZYH33基因组中扩增出pgk片段,构建重组表达质粒pET28a:pgk,经双酶切及测序验证正确的质粒转化入E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,重组PGK蛋白经SDS-PAGE和质谱鉴定并测定其酶学活性.结果:PGK在大肠杆菌中可溶性表达,纯化后得到约43kDa的重组PGK蛋白,其酶促反应最适温度为25℃,最适pH为7.5,2型猪链球菌PGK的酶活性为75U/ml,PGK相对于3-PGA的Km值为1.744mmol/L,Vmax为0.143mmol/(L·min),相对于ATP的Km值为2.266mmol/L,Vmax为0.318mmol/(L·min).结论:利用原核表达系统成功地表达了2型猪链球菌中的PGK,并获得了活性较好的重组PGK,酶学检测发现纯化的PGK具有良好的体外活性,为进一步研究该病在2型猪链球菌致病及代谢机制奠定了基础.

关键词：2型猪链球菌、磷酸甘油酸激酶、克隆表达、酶活性

所属期刊栏目：38

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金81481920,81501725;军队后勤科研计划项目AWS16J021,AWS16J023,BWS14J025,BWS14C051

在线出版日期：2018-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：16-23