ELP30-tag蛋白纯化能力的原核表达研究

摘要：

目的:探究一种小分子量类弹性蛋白标签(elastin-like protein tag,ELP tag)——ELP30-tag在原核表达系统中的蛋白纯化能力.方法:人工合成ELP30-tag基因并将其构建于pET-28a(+)载体,结合2种内含肽(intein1和intein2)基因和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)基因,构建4个含有不同元件序列的原核表达载体:pET-ELP30、pET-ELP30-eGFP、pET-ELP30-intein1-eGFP和pET-eGFP-intein2-ELP30;将表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,并通过可逆相变循环(inverse transition cycling,ITC)纯化重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP、ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30,随后通过调节溶液pH值或添加二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol,DTT)分别诱导intein1和intein2断裂,最后再经ITC分离获得纯eGFP.结果:利用设计的ELP30-tag成功纯化获得了重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP和eGFP-intein2-ELP30;重组蛋白ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30中的内含肽可经诱导发生断裂而释放eGFP,但未能分离获得纯eGFP.由此为小分子量ELP-tag的运用和优化设计奠定了一定基础.

关键词：类弹性蛋白、内含肽、增强绿色荧光蛋白、原核表达、蛋白质纯化

所属期刊栏目：38

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家蚕桑产业技术体系资助项目CARS-18-ZJ0201

在线出版日期：2018-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：54-60