新型R-扁桃酸脱氢酶的基因挖掘及表达鉴定

摘要：

R-扁桃酸脱氢酶在苯乙酮酸的生物合成中起着关键的作用,挖掘具有高催化活性及稳定性的新型R-扁桃酸脱氢酶具有重要的意义.为了获得理想的R-扁桃酸脱氢酶,采用了基因组挖矿技术从Lactobacillus harbinensis菌株中获得了一个新型的R-扁桃酸脱氢酶LhDMDH,重组LhDMDH的比酶活高达1264.3 U/mg,约为探针的4倍,在已报道的R-扁桃酸脱氢酶中处于领先水平.同时,考察了4个重组酶主要的酶学特性,它们的最适反应温度在25 ～ 30℃,最适反应pH在9.0 ～9.5.动力学参数的结果表明,LhDMDH对底物的Kcat值为30.28 S-1,明显高于其它重组酶.此外,底物谱分析的结果也表明LhDMDH在外消旋扁桃酸的手性拆分及苯乙酮酸的生物合成中更具优势.在R-扁桃酸脱氢酶基因挖掘方面取得了较为理想的结果,为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础,也为其它酶的挖掘提供了可资借鉴的经验.

关键词：扁桃酸脱氢酶、基因组挖矿、表达、酶学特性、生物催化

所属期刊栏目：38

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金31372381;河南省科技攻关项目162102210116;河南省科研服务平台专项2016151;河南省南水北调中线水源区水生态安全创新型科技团队专项17454

在线出版日期：2018-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：30-37