海藻多糖通过下调肝癌细胞Hep3B糖酵解途径抑制细胞增殖和迁移

摘要：

目的:探讨海藻多糖(algal polysaccharides,AP)对肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移的影响及其可能的作用机制,为治疗肝癌提供新的思路.方法:①比较正常细胞与癌细胞中糖酵解(embden-meyerhof-parnas,EMP)途径的表达差异,用紫外分光光度计比色法检测EMP限速酶酶活力:己糖激酶(hexokinase,HK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK),用乳酸测定试剂盒测定EMP产物:乳酸.②AP处理Hep3B后,检测EMP表达水平变化.③AP处理细胞后,检测肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移能力及对上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响,方法包括MTT、qPCR和Transwell小室实验.④MTT、Transwell和qPCR检测HK抑制剂3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)对肝癌Hep3B细胞的活力和迁移能力及EMT的影响.⑤Westem blot和相关试剂盒检测AP与3-BrPA分别处理细胞时,对EMP水平及Akt通路的影响.⑥AP联合3-BrPA处理HepB3后,检测HK和Akt信号通路表达水平及细胞活力和迁移的变化.结果:①癌细胞(Hep3B、HeLa、SW480) EMP代谢水平均高于正常肝细胞(HL02),其中Hep3B差异最为显著.②AP能抑制Hep B细胞EMP代谢水平,且抑制程度随着AP浓度升高而升高,存在浓度依赖性.③AP可抑制肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移,且抑制EMT的发生.AP浓度为200mg/ml,处理时间为48h时,生长抑制率达(55±2.8)％,细胞迁移数为对照组的(32±2.9)％;④3-BrPA可下调Hep3B细胞HK活性,并抑制细胞活力与迁移,且抑制EMT的发生.200μ mol/L 3-BrPA作用细胞48h后,与对照组相比,细胞活性下降了(52±5.8)％(P＜0.001),细胞迁移数下降了(48±6.1)％(P＜0.01).⑤AP和3-BrPA均下调EMP代谢水平,且抑制Akt信号通路.⑥AP与3-BrPA联合处理Hep3B后,HK表达下降,显著抑制Akt信号通路,细胞活性和迁移能力均较AP单用组显著下降(P＜0.05).结论:肝癌细胞Hep3B EMP代谢水平高于正常肝细胞,AP可下调Hep3B细胞EMP代谢水平,低EMP代谢水平可能通过下调EMT和Akt信号通路抑制Hep3B的增殖和迁移.当AP和3-BrPA联合应用时,抑制肝癌迁移和增殖效果更明显.

关键词：海藻多糖、EMP途径、Hep3B细胞、细胞增殖、细胞迁移

所属期刊栏目：37

分类号：Q493.4

在线出版日期：2017-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：31-40