鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析

摘要：

为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CA V-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CA V-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用显微镜观察、CCK-8实验与DNA ladders测定其抗肿瘤细胞的活性.结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pBCX-CA V-Apoptin,在37℃正常培养条件下的大肠杆菌中得到大量可溶性表达产物,融合蛋白质分子量大小约为42 kDa,50 ml菌液即可获得1.5 mg左右的纯化重组蛋白,CCK-8实验结果显示纯化后的重组蛋白作用36 h后可对套氏淋巴瘤JEKO-1、REC-1细胞生长产生超过60％的抑制率;显微镜观察与DNA ladder实验证明重组蛋白可诱导JEKO-1、REC-1细胞的凋亡,对HUVEC没有诱导凋亡的作用.免疫印迹分析表明重组凋亡素对JEKO-1细胞诱导了Caspase-3的激活,而对Caspase-8的表达没有影响.研究表明融合蛋白msyB-CAV-Apoptin可达到高效可溶表达,且表达产物具有特异抗肿瘤活性.

关键词：凋亡素、鸡贫血病毒、融合伴侣、高效可溶性表达、活性分析

所属期刊栏目：37

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：河南省国际合作项目152102410055;高层次人才专项项目70638

在线出版日期：2017-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：26-32