以CotC为分子载体在枯草芽孢杆菌表面展示海藻糖合酶

摘要：

海藻糖是自然界中普遍存在的一种非还原性双糖,是一种极好的天然干燥剂和保鲜剂.海藻糖合酶能够催化α,α-1,4-糖苷键连接的麦芽糖直接转化为α,α-1,1-糖苷键连接的海藻糖,是生产海藻糖的首选.为获得具有良好展示效果的海藻糖合酶,将其高效稳定的展示于枯草芽孢杆菌芽孢表面,实验同时分别选取增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和海藻糖合酶(Tres)作为模型蛋白,以来自枯草芽孢杆菌的芽孢衣壳蛋白CotC作为枯草芽杆菌表面展示的锚定蛋白进行表面展示研究.利用流式细胞仪分析EGFP在芽孢表面展示的情况,结果表明芽孢衣壳蛋白CotC可以将EGFP固定在芽孢的表面.然后将荧光蛋白基因egfp通过酶切替换为海藻糖合酶基因tres,将重组菌株使用pH7.5的缓冲液清洗并重悬,与底物浓度为30％的麦芽糖在50℃水浴条件下作用2h,反应产物利用HPLC检测,能够检测到海藻糖峰,通过计算得到的酶活为252U/ml.说明海藻糖合酶基因通过与芽孢衣壳蛋白CotC融合后可被展示在芽孢的表面.

关键词：海藻糖、海藻糖合酶、枯草芽孢杆菌、表面展示、重组表达

所属期刊栏目：37

分类号：Q814.9(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金资助项目31501413

在线出版日期：2017-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：71-80