一株高效氧化胆固醇的简单节杆菌构建与转化条件优化

摘要：

为实现胆固醇的高效生物氧化,利用基因工程手段将编码简单节杆菌胆固醇氧化酶的DNA片段克隆到质粒pTY2中,构建pTY2-5332插入表达载体.该载体以简单节杆菌基因组中的16S rDNA位点为整合点,提高了胆固醇氧化酶在基因组中的拷贝数,实现了简单节杆菌胆固醇氧化酶的过表达.重组菌的生长实验分析表明,插入到16S rDNA位点的胆固醇氧化酶没有影响简单节杆菌的生长.重组菌可在20h将2g/L的胆固醇完全转化为4-胆甾烯-3酮,比原始菌的转化时间缩短了4h,提高了胆固醇的转化效率.经过转化条件优化确定了该重组菌以2％的接种量后继续培养16h,然后胆固醇经120目过筛后投料量为2g/L,并添加2％(体积比)二甲基甲酰胺作为促溶剂;胆固醇添加18h后可完全转化为4-胆甾烯-3-酮,是优化前的1.11倍.

关键词：简单节杆菌、胆固醇氧化酶、胆固醇、4-胆甾烯-3-酮、16S rDNA

所属期刊栏目：36

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划资助项目2011AA02A211-06

在线出版日期：2017-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：70-75