产耐高温谷氨酰胺转胺酶菌株的快速筛选方法

摘要：

目的:采用亚硝基胍(NTG)诱变结合96孔板高通量筛选方法筛选产耐高温谷氨酰胺转胺酶(MTG)的茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis).方法:通过优化96孔板高通量测定MTG活性的方法、确定筛选温度和时间,建立了产耐高温MTG菌株的快速筛选方法;通过优化NTG诱变条件建立了筛选突变库;通过96孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了产耐高温MTG的突变株12-82,并通过摇瓶发酵对12-82所产MTG进行热稳定性分析.结果:采用2mg/ml NTG、pH8.0、60min的诱变条件获得突变株,将突变株的发酵上清液于70℃水浴7.5min,再在37℃空气浴、反应10min的条件下测定MTG活性,从5 200株突变株中筛选出5株产耐高温MTG的突变株,其中突变株12-82在50℃水浴60min以及70℃水浴1.5min的酶活残留率均比出发株高出近20％,且80℃保温2min仍有11.9％的酶活残留率.结论:利用NTG诱变结合96孔板高通量筛选的方法筛选到5株所产MTG热稳定性相对较高的突变株,其中突变株12-82在50℃ 、70℃和80℃的酶活残留率均有10％ ～ 20％的提高.这为高温食品加工领域所需耐高温MTG生产菌株的高效筛选提供了可行性方案.

关键词：茂原链霉菌、谷氨酰胺转胺酶、热稳定性、NTG诱变、96孔板高通量筛选

所属期刊栏目：35

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：中央高校基本科研业务费专项资金资助项目78210203

在线出版日期：2015-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：83-89