靶向抗肿瘤蛋白iRGD-CDD的原核表达及生物活性鉴定

摘要：

目的:原核表达并纯化具有特异性成纤维细胞激活蛋白(FAPα)酶切位点的靶向抗肿瘤GP-CDD-iRGD融合蛋白,利用FAPα的酶切功能切除融合标签,检测其对FAPα阳性肿瘤细胞株的毒性.方法:设计并合成GP-CDD-iRGD基因,插入pGEX-4T3载体,构建重组表达质粒,转化至BL21大肠杆菌感受态细胞中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组融合蛋白的表达,Westernblot检测融合蛋白的表达,经GST亲和柱纯化融合蛋白后,通过体外细胞毒性试验(MTT法)和细胞凋亡实验评价该融合蛋白的靶向抗肿瘤活性.结果:成功构建重组原核表达质粒pGEX-GP-CDD-iRGD,可溶性表达相对分子量约为36 kDa的融合蛋白GST-GP-CDD-iRGD,纯化后蛋白纯度约为90％,经MTT实验测定其对FAPα阳性4T1细胞株的ED50约为18.5 μmol/L,流式细胞术检测到其对FAPα阳性4T1细胞株具有选择性毒性作用,早期凋亡比例达到约28％.结论:原核表达的重组融合蛋白GP-CDD-iRGD对FAPα阴性4T1细胞株未显示毒性,而对FAPα阳性4T1细胞株具有显著的促凋亡作用,为进一步研究其在体内的靶向抗肿瘤活性提供了依据.

关键词：靶向抗肿瘤、融合蛋白、促凋亡、酶切效力

所属期刊栏目：34

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金面上项目81072670资助项目

在线出版日期：2015-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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