半胱氨酸蛋白酶IdeS的原核表达、纯化及活性鉴定

摘要：

酿脓链球菌来源的免疫球蛋白G降解酶(immunoglubulin G-degrading enzyme of Streptococcus pyogenes,IdeS)是一种典型的半胱氨酸水解酶,可以在抗体铰链区的特定位点进行酶切,使IgG水解为完整的F(ab)2片段和Fc片段,由于其独特的酶活特异性和高活性,IdeS可以作为工具酶应用于IgG的亚单位制备、结构分析及表征分析.利用双标签(GST-tag及His6-tag)表达系统在E.coli中高效表达了可溶性重组蛋白酶GST-IdeS-His6,并在IdeS的氨基端与GST之间加上肠激酶酶切位点,以利于标签的去除.再利用亲和层析的纯化方法对目的蛋白进行纯化.使用SDS-PAGE、HPLC-SEC、LC-MS对纯化后的IdeS进行分析和鉴定.结果表明:本系统所表达的蛋白酶IdeS得率高,每1L菌液纯化可获得约25mg纯度为90％以上的蛋白酶IdeS,将此蛋白酶与抗体IgG以1∶100 (m/m)比例混合,于37℃反应30min,即可酶切完全.能够满足蛋白质结构分析中对蛋白酶的高质量要求,并且适用于抗体类药物的表征分析.同时,蛋白酶IdeS也可以应用于生物仿制药、生物改良药和新一代抗体以及Fc-融合蛋白的研究.

关键词：IdeS、原核表达、纯化、酶活鉴定

所属期刊栏目：34

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家“863”计划资助项目2012AA02A307

在线出版日期：2014-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：8-14