人源TNFα的原核表达及活性测定

摘要：

目的:利用SUMO标签构建人TNFα原核表达栽体,通过表达及纯化获得重组蛋白,为深入研究和利用人TNFα奠定基础.方法:利用PCR技术,从质粒pET32a-hTNFα中扩增出人TNFα成熟肽编码序列,并在其上游添加SUMO标签,与原核表达载体pET28a连接,构建表达质粒pET28a-SUMO-hTNFα.在BL21(DE3)工程菌中表达融合蛋白,经Ni-NTA纯化体系纯化,切除SUMO标签,纯化获得hTNFα成熟蛋白.CCK-8法检测TNFα对L929细胞的细胞毒性,以测定TNFα的生物学活性.结果:成功构建pET28 a-SUMO-hTNFα原核表达质粒,酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致.在BL21 (DE3)工程菌中实现了融合蛋白的可溶性表达.经纯化、水解酶切除标签及再次纯化获得hTNFα成熟肽.CCK-8法检测得所制备的TNFα蛋白ED50约为12.8μg/ml.结论:成功构建原核表达载体pET28 a-SUMO-hTNFα,经表达、纯化、酶切及再纯化,获得有生物活性的hTNFα蛋白,为深入研究和利用hTNFα奠定基础.

关键词：TNFα、SUMO、原核表达、生物学活性

所属期刊栏目：34

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划2011CB935800、国家自然科学基金81272311,81071712资助项目

在线出版日期：2014-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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