胰岛素受体底物1和2敲低对猪肝脏细胞糖脂代谢的影响

摘要：

目的:通过shRNA干扰高效敲低猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的表达,进而验证其对于糖脂代谢相关基因表达的影响,为构建2型糖尿病模型猪奠定基础.方法:首先通过重叠PCR方法克隆了猪IRS1基因全部的mRNA序列(4 814bp)以及通过3'RACE方法克隆了猪IRS2基因的部分3'非编码区(3-untranslated region,3'UTR).然后,通过Real-time PCR筛选获得了能显著敲低这两个基因的shRNA片段,并在同时敲低IRS1和IRS2的猪肝脏细胞中,检测糖脂代谢相关基因的表达.结果:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2的表达被显著敲低,分别下降了78％和64％.另外,糖异生作用酶磷酸烯醇丙酮酸激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和果糖-1,6-二磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase,F-1,6-BP)基因表达显著上升,并导致催化肝脏中糖酵解反应的葡糖激酶(glucokinase,Gck)基因表达的显著下降.同时,胆固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins,SREBP-1)基因的表达也显著上升以及胆固醇调节基因Abcg8,CYP7a1表达明显上调.结论:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的敲低可激活糖异生作用,并抑制糖酵解反应,从而导致糖代谢的异常,同时也能引起脂类代谢的异常.

关键词：IRS1、IRS2、RNA干扰、糖脂代谢、猪

所属期刊栏目：34

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2014-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：27-35