2型猪链球菌β-半乳糖苷酶基因的克隆表达及酶活性测定

摘要：

目的:克隆表达2型猪链球菌β-半乳糖苷酶(BgaC)编码基因,并测定其酶活性.方法:根据05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增bgaC基因,构建重组表达质粒pET28a-bgaC,转化E.coli BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE鉴定;最后对表达产物进行亲和层析纯化,获得BgaC纯化蛋白后测定其酶活性.结果:bgaC基因在原核细胞中得到高效表达,重组表达的BgaC分子质量约为69kDa,其酶促反应最适温度为42C,最佳反应时间为30min,最适反应pH为5.5,最佳底物浓度为10mmol/L.2型猪链球菌BgaC的体外酶活为1615U/ml,酶比活为1076U/mg.结论:2型猪链球菌强毒力株05ZYH33中含有bgaC基因,在原核系统高效表达的BgaC具有良好的酶学活性.

关键词：2型猪链球菌、β-半乳糖苷酶、克隆、酶活性

所属期刊栏目：34

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31170124,81171527,81172794,31300119;科技部传染病专项基金2013ZX10004103-004,2013ZX10004801-004,2013ZX10004218-008;江苏省自然科学基金BK2011097,BK2012080;军队“十二五”项目AWS11C001&AWS11L009

在线出版日期：2014-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：39-44