表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价

摘要：

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果.方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒.电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达.肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果.结果:获得了滴度为10 8.25 CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达.二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1∶320和1∶1436.8;中和抗体效价1∶45.3和1∶71.8.结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性.滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答.

关键词：轮状病毒、NSP4、重组腺病毒

所属期刊栏目：34

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技重大专项资助项目20132X10004002-003-05

在线出版日期：2014-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-6