新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证
目的:构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,并对其功能进行验证.方法:设计一个包含人巨细胞病毒启动子( CMV promoter)、T7启动子、信号肽基因、血凝素A表位基因(HA)、多克隆位点区域( MCS)、c-myc抗原表位、血小板来源的生长因子受体跨膜区域(PDCFR TM)及牛生长激素多腺苷酸化信号(BGHpolyA)等八种元素的表达盒Ⅱ(Expressing cassetteⅡ),在其上下游添加NruⅠ酶切位点后,进行人工化学合成,连接到克隆载体pGH中得pGH-Ⅱ;用NruⅠ酶切pGHⅡ,回收1300bp左右的片段,去磷后插入到pVAX1的相应位点,NruⅠ及Bgl Ⅱ/Pst Ⅰ酶切鉴定,获得新型基因疫苗真核表达载体pVAX2；然后以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,将其分别构建至两个不同的表达盒内,脂质体转染BHK-21细胞,利用RT-PCR及荧光显微镜技术进行该载体的功能验证.结果:两个表达盒内的EGFP基因在BHK-21细胞均能高效表达,相互间不受影响,且新构建的表达金具有蛋白展示功能.结论:成功构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体pVAX2,为多价DNA疫苗的研究奠定了坚实基础.
pVAX2、EGFP、双基因表达盒、功能验证
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Q786(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金81001342;军内"十一五"科技攻关项目06G127;吉林省高新技术产业发展项目2010;长春市科技特派员行动计划09KTD4
2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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