禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达

摘要：

目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法:在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMETA/HA(52～1 545bp),pMET A/NA(121～1 254bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Westem blotting和ELISA方法检测其抗原性.结果:重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论:成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础.

关键词：禽流感病毒H9N2、血凝素、神经氨酸酶、真核酵母表达

所属期刊栏目：30

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技支撑计划2006BAD06A15

在线出版日期：2010-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：33-38