人组氨酸磷酸酶PHP14的原核表达及其体外互作蛋白的研究
目的:表达和纯化人组氨酸磷酸酶PHP14蛋白,并寻找与其存在体外相互作用的蛋白.方法:PCR扩增PHP14的全长cDNA,并将其克隆至pGEX4T原核表达载体,构建重组表达质粒.用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione Sepharose 4B凝胶颗粒进行亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳确定融合蛋白的表达.进行GST-Pull down实验,寻找体外与PHP14相互作用的蛋白,并进行质谱鉴定.结果:在大肠杆菌BL21中成功了表达出了PHP14的可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose 4B凝胶颗粒纯化后,获得了纯化的GST-PHP14融合蛋白,GST-Pull down实验和质谱鉴定结果发现PHP14与HSP90在体外存在相互作用.结论:实现了PHP14的原核表达和纯化,发现PHP14与HSP90在体外可能存在相互作用.
PHP14、HSP90、原核表达和纯化、体外相互作用
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Q789(基因工程（遗传工程）)
国家"973"计划2006CB910100;北京市自然科学基金7051002;北京市科学技术委员会基金Y0204002040111
2010-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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