人IL-6/sIL-6R结合分子模型的建立及在药物筛选中的应用

摘要：

目的:建立人IL-6/sIL-6R结合的分子模型,用于筛选IL-15/sIL-6R的抑制剂.方法:将人 IL-6基因克隆至原核表达载体pET28a(+)中表达IL-6蛋白,Westem blot及人IL-6检测试剂盒分析鉴定表达蛋白.同法将人sIL-6R在pET15b载体中表达,纯化并用Western blot检测目的蛋白.依据ELISA原理建立IL-6/sIL-6R结合的分子模型,并通过改变IL-6、sIL-6R及IL-6 antibody的浓度来优化该模型,用于IL-6/sIL-6R拮抗药物的筛选.结果:人IL-6可在载体PET28a(+)中高效表达,且经Westem blot鉴定正确,人IL-6检测试剂盒检测显示具有较高的免疫活性.sIL-6R在PET15b中表达,Westem blot鉴定正确.通过对IL-6/sIL-6R结合的分子模型的优化,得到其最佳条件为:IL-6R 1μg/well,IL-6 500ng/well,IL-6 antibody 1μg/well.应用该模型筛选发现有些化合物可显著抑制IL-6与其受体的结合.结论:成功构建IL-6/sIL-6R结合的分子模型,为高通量筛选IL-15拮抗剂提供平台.

关键词：IL-6、sIL-6R、蛋白表达、ELISA、药物筛选

所属期刊栏目：29

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2010-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：60-65