野生罂粟COR、BBE基因片段融合及其RNAi载体构建
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野生罂粟COR、BBE基因片段融合及其RNAi载体构建

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可待因酮还原酶(COR)与小檗碱桥酶(BBE)是吗啡合成代谢途直接影响着吗啡合成途径中生物碱的代谢合成.采用RT-PCR从罂粟幼叶克隆出COR和BBE基因全序列,同源性比较结果显示,它们与GenBank上已报道的COR和BBE基因高度同源.利用blast及分子生物学软件DNAStar对COR和BBE基因的cDNA序列同源性进行分析比较,分别从各基因中筛选和克隆了一段同源性极低、约400~500 bp的片段;并应用重叠PCR法将其拼接成744 bp的融合基因BC,以中间载体pHANNIBAL和植物表达载体pART27为基础,构建了以CaMV 35S启动子驱动的含有"正向:BC融合片段-pdk内合子-反向BC融合片段"的ihRNAi植物表达载体,通过转化野生罂粟,初步研究了以COR和BBE基因为靶标的RNAi对内源吗啡合成的抑制效果,为进一步培育低吗啡高蒂巴因的罂粟种质提供了依据.

野生罂粟、RNAi调控、COR和BBE融合基因

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Q78(基因工程(遗传工程))

教育部博士学科点研究基金2007733008;甘肃省卫生厅重点中医药科技项目2008HDT002;甘肃省农垦总公司科技项目GZK-2009-10

2010-01-15(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共7页

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中国生物工程杂志

1671-8135

11-4816/Q

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2009,29(11)

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