基因重组胰高血糖素样肽-1衍生多肽的表达和产物纯化与鉴定

摘要：

为研究利用基因重组方法生产人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)衍生多肽的最佳表达及纯化条件,选用大肠杆菌偏爱密码子,以含人GLP-1的质粒为模板,用PCR方法合成全长人GLP-1衍生多肽基因,并定向插入到高效表达载体pMFH中,用大肠杆菌BL21进行表达,融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,用C18 Sep-Pak 反相柱脱盐,然后融合蛋白经甲酸水解,水解产物经Ni-NTA柱和高效液相色谱(HPLC)纯化制备后,目的肽由质谱鉴定. 实验结果表明:利用载体pMFH在BL21中,GLP-1衍生物的最佳诱导表达温度为37℃、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的最佳浓度为0.6mmol/L,最佳诱导表达时间为6h;HPLC分析和制备GLP-1衍生物最佳条件为:流动相A(10% CNCH3∶90% H2O,0.1%TFA),流动相B(100% CNCH3,0.1% TFA),流速1ml/min,30 min线性梯度洗脱,B相至70%,检测波长280nm;质谱鉴定GLP-1衍生物的分子量为5.492kDa,与理论值相符合.在最佳表达及纯化条件下可得GLP-1衍生多肽的产量可达到11.6mg/L发酵产物,纯度≥98%.

关键词：基因重组、胰高血糖素样肽-1衍生多肽、高效液相色谱、质谱

所属期刊栏目：29

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广州市科技攻关计划2006Z3-E4152

在线出版日期：2009-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-6