人γ-精浆蛋白的亲和纯化及其糖基化分析

摘要：

目的:从人精液中提纯γ-精浆蛋白并对其生物学特性进行鉴定.方法:应用饱和硫酸铵法从小鼠腹水中纯化出抗γ-精浆蛋白的单克隆抗体E4B7,将其共价交联到CNBr-Sepharose4B上,制备成免疫亲和层析柱,用该层析柱亲和纯化经饱和硫酸铵粗提的精液标本.纯化产物分别用SDS-PAGE、Western-blot及ELISA进行生物学特性鉴定,最后经PNGase F、Endo-H酶消化后进行糖基化分析.结果:SDS-PAGE电泳表明纯化蛋白的相对分子量约为44kDa,Western-blot及ELISA鉴定显示该蛋白可与抗γ-精浆蛋白的单抗E4B7特异性结合.对纯化蛋白无论是单用Endo-H酶消化,还是同时用Endo-H酶和PNGase F酶共同消化,消化产物电泳后相对分子量均降低到34kDa左右,而单独用PNGase F酶消化后相对分子量没有改变.Western-blot及ELISA鉴定显示糖苷酶处理后的纯化蛋白仍可与单抗E4B7特异性结合.结论:成功纯化出N-糖基化形式的γ-精浆蛋白,这为下一步筛选人源化抗体奠定了纯的抗原基础.

关键词：γ-精浆蛋白、亲和层析、糖基化

所属期刊栏目：27

分类号：Q5(生物化学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA215321;国家重大科技专项资金2002AA2Z3109

在线出版日期：2007-04-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：99-102