非洲猪瘟病毒VP73基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达

摘要：

参照Genebank中非洲猪瘟VP73基因序列,人工合成的VP73全基因克隆至pMD 18-T克隆载体质粒中,采用PCR扩增得到1188 bp的VP73基因;将VP73基因片段亚克隆插入pBAD/Thio表达载体,经测序鉴定,筛选获得VP73基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了非洲猪瘟病毒VP73基因重组表达载体.经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP73蛋白抗原.SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.002%的L-Arabinose进行诱导,4h后表达量最高,表达蛋白为融合蛋白,分子量约60kDa,表达产量约占菌体总蛋白的30%.Western blotting和ELISA检测表明,表达的融合蛋白能与非洲猪瘟阳性血清发生特异性反应,说明表达获得的产物为非洲猪瘟病毒VP73融合蛋白,且具有良好的反应原性,这为应用该表达蛋白抗原制备ASFV免疫血清学诊断试剂和疫苗研究奠定了基础.

关键词：非洲猪瘟病毒、VP73基因、克隆、表达

所属期刊栏目：26

分类号：S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)

资助基金：国家科技专项基金2001BA804A48

在线出版日期：2006-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：8-13