插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建

摘要：

根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含一loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP.克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP.基于同源重组原理,pSKLR-GFP-loxP与PRV SH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1.将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点,筛选得到含单个loxP位点的重组病毒株rPRV2.PCR扩增证实所获得的重组病毒TK缺失270bp,只有一个34bp的loxP位点,并且能在RK-13细胞上稳定传代.LD50试验表明rPrV2的毒力下降.

关键词：伪狂犬病病毒、TK基因、Cre、loxP、GFP重组病毒

所属期刊栏目：26

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：36-40