霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析

摘要：

构建了霍乱毒素B亚单位(oholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素(insulin)B链的融合基因CTB-INSB,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIB;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后的表达产物经15%SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,其分子量约为15.4kDa,且主要以包涵体形式存在,约占全菌蛋白的30%.含CTB-INSB重组蛋白的包涵体经变性和复性后,可在体外自组装成五聚体结构.Westernblotting分析结果显示CTB-INSB可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别,表明该蛋白具有霍乱毒素B亚单位与胰岛素的双重抗原性.同时GM1-ELISA分析结果表明CTB-INSB在体外可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异结合,进一步证实了它能够形成类似CTB五聚体的高级结构,具有生物活性.

关键词：霍乱毒素B亚单位、胰岛素B链、融合基因CTB-INSB、原核表达、神经节苷脂、GMl

所属期刊栏目：25

分类号：R37;S85

资助基金：中国科学院资助项目30170818

在线出版日期：2005-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：56-61