人IL-18的基因克隆、表达及纯化

摘要：

目的:克隆人IL-18基因,并构建高表达人IL-18的工程菌,纯化获得重组人IL-18.方法:从人肿瘤组织内提取总RNA,利用逆转录聚合酶链反应扩增人IL-18基因,在基因的5′和3′端分别加上NcoI和EcoRI酶切位点,酶切后直接克隆至质粒表达载体pET28a(+)内,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑选转化子,IPTG诱导后SDS-PAGE筛选高表达人IL-18的工程菌.提取表达菌质粒进行DNA序列分析.表达菌大量培养及IPTG诱导后,超声破菌收集包涵体,十二烷基肌苷酸钠溶解后用阳离子柱和分子筛纯化.结果:克隆的人IL-18基因序列完全正确,工程菌表达的人IL-18约占菌体蛋白30%,以包涵体形式存在,经阳离子柱和分子筛纯化获得了较纯的人IL-18.结论:可用构建的工程菌大量制备人IL-18,为开展人IL-18药物的临床前研究奠定了基础.

关键词：人IL-18、基因克隆、表达、纯化

所属期刊栏目：24

分类号：Q81(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2004-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：78-83